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請收好這份抗體保存指南!

很多小夥伴在收到抗體後,不知道該如何正确保存抗體産品?為什麼有的産品要保存在-20°ï¼Œæœ‰çš„卻要放在4°å†°ç®±ï¼Ÿä¸åŒé¡žåž‹æŠ—體儲存時候是否有差異?本篇将重點解答以上疑問,請保存好這份abcam抗體保存指南,以便于以後查詢。

一、保存溫度

  • 對于我們的許多抗體而言,分裝為小等份(推薦每份體積為 10 μL)在 -20 ℃ 或 -80 ℃ 下凍存是最佳的保存條件。分裝抗體可以最大限度減少凍融對抗體造成的損壞,還可避免多次從同一管中移取抗體而引入污染。分裝後抗體隻可凍融一次,如有剩餘,應保存在 4 ℃ 下。

  • 收到抗體後,請以 10,000 × g 離心 20 秒,沉降滞留在管蓋螺紋中的溶液,然後分裝抗體并将其轉移至低蛋白質結合的微量離心管中。分裝抗體的量取決于您在實驗中常用的量。分裝抗體應不少于 10 μL;分裝抗體量越少,濃度就越容易受到蒸發以及儲存樣品管表面吸附的影響。

  • 在大部分情況下,可在收到抗體之後立即将其保存于 4 ℃ 下,可保存 1 至 2 周。具體産品還請遵循數據表上的保存建議,這一點非常重要!

 

二、特例

  • 切勿凍存酶偶聯的抗體,而應将其保存在 4 ℃ 下。凍融不僅會影響抗體的結合能力,還會降低酶活性。

  • 偶聯抗體(無論是偶聯有熒光染料、酶還是生物素)應保存在深色樣品瓶中或用錫箔紙包裹樣品瓶。暴露于光下會影響偶聯物的活性。熒光偶聯物尤其容易發生光緻漂白,因此在實驗各階段都應避光保存。

  • IgG3 同型抗體的獨特之處在于其解凍後容易形成聚集體,因此應始終保存在 4 ℃ 下。

  • 腹水液中可能含有蛋白酶,因此收到後應盡快凍存。

三、污染

  • 為了防止微生物污染,可将疊氮化鈉加入抗體制備物中,疊氮化鈉的最終濃度為 0.02% (w/v)。我們的多款抗體中都含有這種保護劑,其濃度範圍為 0.02%-0.05%。每個抗體産品數據表的保存緩沖液部分将對此進行說明。

 

四、不使用疊氮化鈉的情況

  • 如果要用抗體對活細胞進行染色或處理,或者要用抗體進行體内研究,請務必使用不含疊氮化鈉的制備物。這種抗菌劑對大部分生物體都有毒害作用:它會阻斷細胞色素電子傳遞系統。

  • 疊氮化鈉會幹擾涉及胺基的所有偶聯反應,因此必須在進行偶聯反應之前将其去除。完成偶聯反應之後,可使用疊氮化鈉保存抗體。另一種可用的抗菌劑是 0.01% 硫柳汞鈉(硫柳汞),這種物質不含伯胺。

  • 抗體溶液中的疊氮化鈉可通過滲析或凝膠過濾去除。IgG 的分子量為 150,000 Da(IgM 約為 600,000 Da),疊氮化鈉的分子量為 65 Da。截留分子量為 14,000 Da 的微滲析裝置可使疊氮化物順利擴散出去,而抗體得以保留。

  • 滲析過程在燒杯中(置于磁力攪拌器上,溫度保持 4 ℃)進行,每毫升抗體使用至少 1 升預冷的 PBS,攪拌滲析裝置 6 小時。更換 PBS 兩次,每次更換後均攪拌至少 6 小時。如有可能,所有材料都應滅菌,并且應在無菌條件下處理所得制備物。

五、凍融損壞

  • 反複凍融可能使抗體變性,導緻抗體形成聚集體,從而降低其結合能力。所以抗體産品務必要避免反複凍融。

  • 對大部分抗體而言,在 -20 ℃ 下保存就已足夠;在 -80 ℃ 下保存并無明顯優勢。應避免使用無霜冰箱,因為此類冰箱的凍融循環(用于減少霜的形成)正是保存此類抗體需要避免的。出于相同的原因,應将抗體樣品瓶放在冰箱中溫度波動最小的區域,例如抵靠冰箱背闆放置而不是置于冰箱門架上。

  • 有些研究人員向抗體中加入冷凍保護劑甘油(最終濃度為 50%)以防止凍融損壞;甘油可将冷凝點降至 -20 ℃ 以下。雖然這種方法可用于多種抗體,但我們僅對少數幾種 Abcam 抗體在這種保存條件下的穩定性進行了測試,我們僅擔保遵循數據表建議進行保存的抗體的性能。我們不建議在 -80 ℃ 下保存含甘油的溶液,因為該溫度低于甘油的冷凝點。請注意,甘油可能會被細菌污染。如果加入了甘油或任何冷凍保護劑,應當小心操作,确保獲得無菌制備物。

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六、蛋白質和穩定劑

  • 将抗體稀釋至工作濃度後,在 4 ℃ 下保存不得超過一天。一般而言,以高濃度保存的蛋白質更不易降解,理想濃度是 1 mg/mL 或更高。這就是将蛋白質(如 BSA)作為穩定劑加入抗體溶液的基本原理。加入的蛋白質還能盡可能減少抗體結合到容器壁上造成的損失。請勿向将要進行偶聯的抗體中加入蛋白質穩定劑,因為蛋白質穩定劑會與抗體競争,降低偶聯效率。

 

 

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